Inducción de fenotipo presentador de antígenos y apoptosis en células de leucemia linfática crónica B incubadas con oligodeoxinucleótidos sintéticos con motivos PyNTTTTGT (IMT504) / Phenotype´s induction presenter of antigens and apoptosis in cells of incubated lymphatic leukemia chronic B with oligodeoxynucleotides synthetics with PyNTTTTGT(IMT504) reasons

Introducción: El sistema inmune no es capaz de reconocer los cambios en células transformadas por mutaciones en la leucemia linfática crónica de estirpe B (LLC-B). Su incubación con linfocitos autólogos no induce citotoxicidad. Puede deberse a la ausencia de linfocitos T citotóxicos o a la incapacidad de las células de LLC en expresar moléculas coestimulatorias (CD80, CD86), a pesar de tener expresión de HLA clase I y II. El ADN bacteriano y los ODNs que contienen motivos PyNTTrrGT, CpG y otros motivos, pueden activar a los monocitos, las células dendríticas y los linfocitos B. Aparte, algunos ODNs tienen efectos directos sobre las células LLC-B. Material y métodos: se incubaron células leucémicas provenientes de 20 pts. con LLC-B con 3 diferentes ODNs: a) IMT504, con motivos PyNTTrrGT b) 2006 con motivos CpG y c) ODN inactivo de control. Previo y posterior a la incubación se efectuaron determinaciones de CD80, CD86, CD40, MHC clase I y II, CD5, CD19 y CD20 por citometría de flujo. Además se determinó (por medio de la detección de fosfatidilserina por la unión ala Anexina V) la capacidad de inducir la apotosis de las células transformadas, y se estudió la morfología de las células en cultivo. Resultados: Se observó el aumento de la detección de fosfatidilserina por la unión ala Anexina V) la capacidad de inducir la apotosis de las células transformadas, y se estudió la morfología de las células en cultivo. Resultados: Se observó el aumento de la expresión de CD80, CD86 y CD40 en las células incubadas con IMT504 y 2006. Además las células LLC-B expresaron significativamente mayor cantidad de Anexina v. La morfología de las células en cultivo a largo plazo mostró las características de apoptosis. Los estudios efectuados con el ODN de control no mostraron ninguna de las características descritas. Conclusión: La incubación de ODN con motivos PyNTTTTGT (IMT504) y con motivos CpG (2006) induce en las células de LLC-B un fenotipo considerado de células presentadoras de antígenos, y además apoptosis. Perspectiva: En otros estudios preclínicos y clínicos los ODNs han demostrado muy baja toxicidad, lo que permitiria efectuar estudios de Fase I/II en LLC-B

Birth of the domains Bacteria, Archaea and Eucarya and of major taxa within them: a hypothesis

A hypothesis to explain how the birth of the Bacteria, Archaea and Eucarya domains and of major taxa within them took place is presented. It is proposed that the birth of each domain was an independent event consisting in the genetic isolation of a particular cell from a very diverse pool of [quot ]primitive cells[quot ]. Cells within this pool have a dynamic pattern of cell fusion followed by mostly illegitimate DNA recombination. It is postulated that genetic isolation was achieved: a) by evolution of the peptidoglycan layer in Bacteria, b) by evolution of a glycoproteic cell wall in Archaea, and c) by evolution of the nuclear membrane in Eucarya. It is also postulated that, within each domain, branching was a consequence of sporadic events of fusion between two cells of different phylogenetic lineages, followed by mostly illegitimate DNA recombination and cell wall regeneration. The two fusing cells may have belonged to the same domain, to different domains or even one may have belonged to one of the domains and the other to the pool of [quot ]primitive cells[quot ]. In this last case, new complex phenotypes, previously absent from all the domains, were suddenly introduced in one of them (e.g.: photosynthesis in Bacteria, methanogenesis in Archaea). A corollary of this theory is that genes should have a phylogenetic tree with defined nodes while organisms are characterized by discontinuities instead of nodes.

Tratamiento de las neoplasias cervicales intraepiteliales de alto grado con interferoon alfa leucocitario por vía intralesional / Treatment of neoplasm cervical with IFN leukocyte Alfa Through intralesional via

Se analiza el material de 10 pacientes tratados con IFN alfa leucocitario por vía peri e intralesional. Sus edades oscilan entre 21 y 38 años (promedio 26,6 años). En 3 casos el diagnóstico histopatológico fue de CIN II a III y en 7 casos fue de CIN III. La respuesta al tratamiento fue evaluada por colposcopia, citología e histología. Las parejas masculinas se controlaron con penoscopias. El tiempo promedio de seguimiento fue de 19,3 meses con un rango de 12 a 30 meses. Del total, nueve pacientes prestaron remisión completa histológica d esus displasias. Una paciente no respondió a la terapia. Al año del tratamiento ninguna de las pacientes que completaron este control presentaron recidivas. Las recurrencias histológicas observadas fueron hasta el momento a CIN I. Cuatro de las cinco pacientes con condilomas detectados en la penoscopia remitieron luego del tratamiento. En función de estos resultados se podría considerar el tratamiento con IFN alfa una opción terapêutica válida

Purificación parcial de interferón humano tipo alfa para su uttilización en productos farmacéuticos / Partial purification of Hu-IFN-* for pharmaceutical purposes

La purificación parcial del Hu-IFN-* se logra en un solo paso por adsorción y elución sobre ácido silícico. La recuperación de la actividad antiviral es del 80-100 por ciento, con un aumento de la actividad específica de aproximadamente 20-80 veces. El producto obtenido por este método es estable y apropiado para ser utilizado en terapéuticas locales

Molecular cloning of rotavirus genome

Los rotavirus son los principales agentes responsables de las gastroenteritis virales humanas y animales. La identificación y caracterización de su genoma es necesaria para la comprensión de esta patología así como para el desarrollo de nuevos métodos de diagnóstico y, eventualmente, para la preparación de antígenos virales utilizando técnicas de DNA recombinante. Estos virus poseen un genoma formado por once fragmentos de RNA doble cadena (cd). Aquí se describe la construcción de bancos de cDNA para rotavirus bovino y humano, ambos purificados de materia fecal. Los cDNA fueron preparados por síntesis in vitro utilizando transcriptasa reversa sobre los RNAs genómicos virales, previamente poliadenilados en sus extremos 3. Los cDNAs fueron ligados a un vector plasmídico y propagados en E. coli. Se obtuvieron genotecas correspondientes a los virus bovino y humano con 500 y 100 recombinantes respectivamente. Análisis de restricción de algunos clones permitieron establecer el tamaño de los insertos correspondientes a los distintos segmentos genómicos virales. Dos de estos clones fueron caracterizados, determinándose que contienen las secuencias completas de los fragmentos 10 y 8 del virus bovino. La utilización de estos clones como sondas radioactivas nos permitió diagnosticar la presencia de rotavirus en muestras de materia fecal mediante la detección de los correspondientes RNAs. Este ensayo pudo ser utilizado para la detección viral en muestras infectadas provenientes de distintas especies

Estudios sobre la producción de un Interferón recombinante alfa humano expresado bajo el control del promotor lac UV5 de Escherichia coli / Research on production of recombinant alpha human interferon expressed by control of lac UV5 promotor of Escherichia coli

La inserción de un oligonucleótido de 18 pares de bases en el sitio Pvull, ubicado en la región que codifica para el prepéptido del gen de IFN * 2 humano, resultó en un notable incremento en la actividad antiviral producida en E. coli bajo el control de los promotores lac UV5 situado en un plásmido recombinante. El máximo de actividad antiviral específica, cuando se utilizó E. coli HB 101 como célula hospedadora, se produjo en la mitad de la fase exponencial, después de lo cual se observó una marcada caída. Cuando se utilizó E. coli JM 101, que solo permite la síntesis del antiviral en presencia del inductor (IPTG), el máximo se observó una hora y media después de agregado este inductor, cualquiera fuere el punto de la curva de crecimiento. El contenido plasmídico por célula durante el ciclo de crecimiento se mantuvo constante. Cuando se amplificó el número de copias del plásmido por pretratamiento de las bacterias con cloranfenicol, se amplificó la capacidad de síntesis en los puntos iniciales de la curva de crecimiento. La vida media del antiviral en extractos bacterianos crudos fue de 75 minutos a 37-C y 165 minutos a 30-C. La disminución de la temperatura de cultivo de 37-C a 34-C durante la producción, aumentó la velocidad inicial de acumulación del producto, pero el máximo alcanzado en la actividad específica del antiviral no varió

Producción de un polipéptido con actividad antiviral por fusión del gen interferón-alpha 2 humano al gen lacZ del bacteriófago M13mp8 / Production of a polypeptide with antiviral activity by fusion of the alpha 2 IFN gen to the lacZ gen in the M13mp8 bacteriophage

Un gen de IFN-* recientemente aislado en nuestro laboratorio a partir de una librería de ADN crosomal humano, fue genéticamente manipulado in vitro para poder acortar la secuencia señal y mejorar el rendimiento de IFN en cultivos bacterianos. Primero, la secuencia señal fue acortada en una extensión equivalente a nueve codones, usando la enzima de restricción HacIII y la secuencia remanente fue fusionada en fase con el codón iniciador del gen lacZ presente en el bacteriófago M13mp8. Uno de los clones recombinantes fue analizado en detalle. Este clon mostró una alta inestabilidad del inserto y una baja producción de actividad IFN, con un rendimiento similar al obtenido con el gen pre-IFN-*2 completo. El gen fusionado lacZ/IFN-* fue entonces transferido por clonaje mplecular al plásmido pBR322. Uno de los clones obtenidos mostró una buena estabilidad del plásmido híbrido, y aunque el rendimiento de actividad de IFN fue bajo (3x 10 a la 5 unidades/ml de extracto bacteriano crudo) la producción se mantuvo aún después de más de 20 pases. Finalmente, la secuencia señal recombinante presente en este clon fue nuevamente acortada en una extensión equivalente a 4 codones y se encontró que uno de los nuevos clones incrementaba aproximadamente en 20 veces el nivel de producción de actividad IFN. A pesar de que el polipéptido sintetizado constituye un producto de fusión, la actividad biológica antiviral de IFN parece quedar conservada